Biblioteca cuyo origen se encuentra en la extensa colección bibliográfica atesorada por Hernando Colón, hijo de Cristóbal Colón. Creada en Sevilla en 1518, Hernando Colón la proyectó inicialmente en 1509; durante su estancia en Roma en 1513 puso en marcha el proyecto que cristalizó en 1518; en 1522 contrató el primer personal que se ocupó de la biblioteca. La biblioteca de Hernando Colón fue una de las bibliotecas privadas más importantes de su época que se nutrió de las numerosas compras que hizo su promotor a lo largo de diversos viajes, las donaciones de aquellos humanistas que mantuvieron estrecha relación relación personal con el bibliófilo e, incluso, de los aportes económicos que hizo Carlos V para su crecimiento. Hernando Colón no escatimó a la hora de contar con reputados humanistas que le ayudaran en la gestión de este vasto patrimonio. La biblioteca fue heredada, por disposición testamentaria de Hernando Colón, por el cabildo de la catedral de Sevilla, ya que su heredero directo, Luis Colón, no mostró interés en recibir el legado bibliográfico.

La Biblioteca Colombina forma parte de la Institución Colombina que también alberga la Biblioteca Capitular, la Biblioteca del Arzobispado de Sevilla, el Archivo de la Catedral y el Archivo del Arzobispado de Sevilla.